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Terreno nutritivo agar alcalino per l'isolamento del colera vibrio. Terreni di coltura Agar alcalino

Agar sangue per il test CAMP. Al 2% di agar nutriente, pH 7,4-7,6, aggiungere lo 0,2% di glucosio ed eritrociti di pecore o bovini. Gli eritrociti del sangue citrato vengono lavati tre volte con una soluzione isotonica di cloruro di sodio per rimuovere l'antiemolisina che può essere contenuta nel siero, quindi vengono risospesi nella stessa soluzione fino al volume di sangue originale. Aggiungere il 5% di sospensione di eritrociti all'agar.

Bile - agar alcalino (di seguito denominato ZhShA). Agar nutriente secco - 35,0 g; autolisato di lievito - 20,0 ml; glucosio - 10,0 g; acqua distillata - 600 ml. L'agar viene sciolto, filtrato, si aggiungono bile di bue fresca - 400,0 ml e carbonato di sodio - 5,0 g.

Sterilizzare il terreno preparato in autoclave a 112 0 C per 15 minuti. Prima di versare nelle coppette, al terreno vengono aggiunti 50,0 ml di sangue fresco (di pecora, coniglio o umano), 12,5 ml di una soluzione allo 0,01% di cristalvioletto e 20 ml di una soluzione di idrossido di potassio (di seguito KOH).

Latte con blu di metilene. Il latte fresco viene portato a ebollizione, lasciato per un giorno, liberato dalla panna, fatto bollire di nuovo, lasciato ancora per un giorno e lo strato superiore viene nuovamente rimosso. Il latte scremato in questo modo viene filtrato attraverso uno spesso strato di cotone idrofilo, alcalinizzato con una soluzione di carbonato di sodio al 10% a pH 7,2. A 100 ml di latte aggiungere 2,0 ml di una soluzione acquosa all'1% di blu di metilene. Il mezzo così preparato viene versato in provette sterili da 5,0 ml, sterilizzate con vapore fluente per 3 giorni per 30 minuti.

Ambiente diagnostico differenziale enterococcico (EDDS). Agar nutriente secco - 35 g, autolisato di lievito per la preparazione di terreni nutritivi - 20 ml, glucosio - 10 g, acqua distillata - 800 ml. Sciogliere quando riscaldato, filtrato, sterilizzato a 112 0 C in autoclave per 15 minuti, pH 7,2-7,4.

Prima di versare nelle tazze, TTX - 0,1 g viene aggiunto al mezzo nutritivo; una soluzione acquosa di cristalvioletto 0,01% - 12,5 ml; acido nalidixico - 0,1 g; latte scremato sterile, riscaldato a 44-45 0 С - 200 ml; sangue fresco defibrinato (animali o umani) - 50 ml. Il contenuto viene accuratamente mescolato e versato in tazze da 7 ml.

Agar nutriente zucchero-lievito con tellurito di potassio. Agar nutriente secco - 35 g, autolisato di lievito - 20 ml, glucosio - 10 g, acqua distillata - 1000 ml. La miscela preparata viene sciolta mediante riscaldamento, viene aggiunto citrato di sodio - 5,0 g Il terreno viene sterilizzato a 112 0 . C per 15 minuti, pH 7,2-7,4. Prima di versare il terreno in coppette sterili, aggiungere 50 ml di siero di cavallo, 0,1 g di acido nalidixico e 0,7 g (35 ml di una soluzione acquosa al 2%) di tellurito di potassio, miscelare accuratamente.

Brodo nutriente con glucosio. A 100 ml di brodo nutriente, pH 7,2-7,4, aggiungere 0,2 g di glucosio.

Il mezzo preparato viene sterilizzato frazionalmente per 3 giorni consecutivi per 20 minuti o una volta per 15 minuti a 0,5 atm. in autoclave.

Agar sangue al 5%. A 100 ml di agar nutriente al 2%, sciolto e raffreddato a 45 gradi. C, pH 7,4-7,6, osservando le regole di asepsi, aggiungere 5 ml di sangue defibrinato di pecora, cavallo o coniglio. La miscela viene accuratamente miscelata, versata in tazze con uno strato di 3-4 mm.


Informazioni correlate:

  1. III. Fattori del microambiente dell'industria del turismo nella regione di Voronezh
  2. Regolamentazione amministrativa e legale della tutela dell'ambiente. Statuto amministrativo e giuridico delle autorità ambientali

Vitamine in dosaggi prescritti con precisione. Gli amminoacidi sono usati come fonti di azoto. Il vantaggio di questi terreni è che hanno una composizione costante, possono essere utilizzati per determinare i bisogni dei microbi per determinati nutrienti.

I mezzi nutritivi densi vengono preparati da quelli liquidi con l'aggiunta di un sigillante. L'agar-agar è solitamente usato come sigillante. Agar-agar - un prodotto ottenuto da alghe, è una polvere o lastre giallastre, contiene polisaccaridi ad alto peso molecolare, non viene scomposto dalla maggior parte dei microrganismi, non viene distrutto dall'autoclave, non modifica il valore nutrizionale del terreno, non inibisce la crescita dei microbi. Per i campi immunologici e batteriologici viene utilizzato l'agar congelato e chiarificato, che si scioglie a una temperatura di 85-100 ° C durante l'ebollizione o la sterilizzazione in autoclave di una miscela di polvere con acqua e forma un gel quando viene raffreddato a 45-48 ° C.

Per la preparazione di terreni nutritivi densi, l'agar-agar viene aggiunto a una concentrazione dall'1,5 al 3%.

Ambienti semplici.

Brodo di carne al peptone (MPB)è la base proteica di tutti gli ambienti.

Esistono diversi modi per preparare MPB:

a) su acqua di carne con l'aggiunta di peptone pronto - questo è il cosiddetto brodo di peptone di carne;

b) sulla digestione dei prodotti dell'idrolisi della materia prima con l'ausilio di enzimi (tripsina - brodo di Hottinger, pepsina - brodo di martora).

Sono convenienti per il trasporto, possono essere conservati a lungo, sollevano i laboratori dall'enorme processo di preparazione dei supporti e avvicinano alla risoluzione il problema della standardizzazione dei supporti. L'industria medica produce terreni secchi di Endo, Levin, Ploskirev, agar bismuto solfito, agar nutriente, carboidrati con indicatore BP e altri.

termostati

I termostati sono usati per coltivare microrganismi.

Un termostato è un dispositivo che mantiene una temperatura costante. Il dispositivo è costituito da un riscaldatore, una camera, doppie pareti tra le quali circola aria o acqua. La temperatura è regolata da un termoregolatore. La temperatura ottimale per la riproduzione della maggior parte dei microrganismi è di 37°C.

Metodo di preparazione della piastra di agar

L'MPA viene fuso a bagnomaria, quindi raffreddato a 50-55°C. Il collo della fiala viene bruciato alla fiamma di una lampada ad alcool, si aprono le piastre Petri in modo che il collo delle fiale entri, senza toccare i bordi della piastra, si versano 10-15 ml di MPA, si chiude il coperchio, agitare il piatto in modo che il mezzo sia distribuito uniformemente, lasciarlo su una superficie orizzontale fino a solidificazione. Dopo l'essiccazione, le piastre con piastra agar vengono conservate al freddo.

Semina ad anello

Una goccia di materiale viene prelevata con un anello sterile raffreddato, un bordo della tazza viene leggermente aperto con la mano sinistra, viene inserito un anello all'interno e vengono eseguiti alcuni colpi sul bordo opposto in un punto, quindi l'anello viene strappato e il materiale viene inoculato con tratti paralleli da un bordo all'altro della tazza con un intervallo di 5-6 mm. All'inizio della semina, quando ci saranno molti microbi sull'ansa, daranno una crescita confluente, ma ad ogni colpo dei microbi sull'ansa, ci saranno sempre meno microbi, e rimarranno solitari e daranno colonie isolate.

Semina secondo il metodo Drygalski

Questo metodo viene utilizzato durante la semina di materiale abbondantemente seminato con microflora (pus, feci, espettorato). Per la semina secondo il metodo Drygalsky vengono prese una spatola e diverse tazze (3-4). Spatola- questo è uno strumento fatto di filo metallico o dardo di vetro, piegato a forma di triangolo oa forma di L. Il materiale viene introdotto nella prima tazza con un'ansa o una pipetta e distribuito uniformemente con una spatola sulla superficie del terreno, con la stessa spatola, senza bruciarlo, il materiale viene strofinato nel mezzo nutritivo nella seconda tazza, quindi nel terzo. Con questa inoculazione, la prima piastra avrà una crescita confluente e le colonie isolate cresceranno nelle piastre successive.

Isolamento della cultura pura secondo Shchukevich

Per la semina, prendi un mezzo nutritivo appena preparato con condensa. Il materiale di prova viene prelevato con un'ansa e introdotto con cautela, osservando le regole dell'asepsi, senza toccare il mezzo e le pareti, nell'acqua di condensazione. I batteri con elevata motilità "si insinuano" sulla superficie bagnata dell'inclinazione dell'agar.

Come risultato del lavoro indipendente, lo studente dovrebbe sapere:

1. Classificazione, morfologia dei funghi, loro metodi di studio.

2. Classificazione e morfologia degli actinomiceti.

3. Regole dei regimi antiepidemici e precauzioni di sicurezza.

Essere in grado di:

1. Differenziare i microrganismi al microscopio.

2. Preparazioni colorate microscopicamente.

3. Disinfettare il materiale, trattare le mani con disinfettanti.

4. Preparare preparati da colture pure.

Descrizione 10733-00005

Descrizione del terreno nutritivo Agar alcalino

Agar alcalino medio nutriente- terreno nutritivo denso per l'isolamento del colera vibrio.
La composizione di alta qualità è abbastanza nutriente e favorisce la rapida formazione di colonie di vibrioni, mentre il pirosolfito di sodio sopprime parzialmente la microflora di accompagnamento.
Il fattore selettivo è un aumento del livello di pH, che alla fine sopprime lo sviluppo di microrganismi estranei e non influisce sulla crescita dell'agente patogeno del colera.

Specifiche del terreno nutritivo Agar alcalino

Il fattore selettivo è un aumento del livello di pH, che alla fine sopprime lo sviluppo di microrganismi estranei e non influisce sulla crescita dell'agente patogeno del colera.
La coltivazione viene effettuata a 37°C per 12-14 ore.

Composizione dell'agar alcalino :
Idrolizzato pancreatico di farina di pesce, peptone enzimatico secco, estratto di lievito, glucosio, fosfato di sodio disostituito, cloruro di sodio, metabisolfito di sodio, carbonato di sodio, agar.

Preparazione dell'agar alcalino:
Il preparato nella quantità necessaria alla preparazione di una serie specifica di terreno nutritivo viene miscelato in 1 litro di acqua distillata, fatto bollire fino a completo scioglimento dell'agar, filtrato attraverso un filtro di garza di cotone, versato in fiale e sterilizzato in autoclave per 20 minuti ad una temperatura
(121±1) °С.
Il mezzo nutritivo pronto è trasparente, giallo. È ammessa una leggera opalescenza.
pH 8,0 ± 0,2
Il terreno preparato può essere conservato per 10-14 giorni ad una temperatura di 2-8 °C in luogo protetto dalla luce.


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