Medio nutritivo de agar alcalino para aislamiento de cólera vibrio. Medios de cultivo Agar alcalino

Agar sangre para la prueba CAMP. A agar nutritivo al 2%, pH 7,4-7,6, agregue glucosa al 0,2% y eritrocitos de oveja o ganado. Los eritrocitos de sangre citratada se lavan tres veces con solución isotónica de cloruro de sodio para eliminar la antihemolisina que pueda contener el suero, luego se resuspenden en la misma solución al volumen de sangre original. Añadir una suspensión de eritrocitos al 5% al ​​agar.

Bilis - agar alcalino (en lo sucesivo, ZhShA). Agar nutritivo seco - 35,0 g; autolisado de levadura - 20,0 ml; glucosa - 10,0 g; agua destilada - 600 ml. Se funde agar, se filtra, se añade bilis de buey fresca - 400,0 ml y carbonato de sodio - 5,0 g.

Esterilice el medio preparado en autoclave a 112 0 C durante 15 minutos. Antes de verter en copas, se añaden al medio 50,0 ml de sangre fresca (de oveja, conejo o humana), 12,5 ml de una solución al 0,01% de cristal violeta y 20 ml de una solución de hidróxido de potasio (en adelante KOH).

Leche con azul de metileno. La leche fresca se lleva a ebullición, se deja durante un día, se libera de la crema, se hierve nuevamente, se deja nuevamente por un día y se retira la capa superior nuevamente. La leche desnatada de esta manera se filtra a través de una gruesa capa de algodón, se alcaliniza con una solución de carbonato de sodio al 10% a pH 7,2. A 100 ml de leche agregar 2,0 ml de una solución acuosa al 1% de azul de metileno. El medio preparado de esta manera se vierte en tubos de ensayo estériles de 5,0 ml, esterilizados con vapor durante 3 días durante 30 minutos.

Entorno de diagnóstico diferencial enterocócico (EDDS). Agar nutritivo seco - 35 g, autolisado de levadura para la preparación de medios nutritivos - 20 ml, glucosa - 10 g, agua destilada - 800 ml. Derretir al calentar, filtrar, esterilizar a 112 0 C en autoclave durante 15 minutos, pH 7.2-7.4.

Antes de verter en tazas, se agrega TTX - 0.1 g al medio nutritivo; una solución acuosa de cristal violeta 0,01% - 12,5 ml; ácido nalidíxico - 0,1 g; leche desnatada estéril, calentada a 44-45 0 С - 200 ml; sangre fresca desfibrinada (animales o humanos) - 50 ml. Los contenidos se agitan a fondo y se vierten en copas de 7 ml.

Agar nutritivo azúcar-levadura con telurito potásico. Agar nutritivo seco - 35 g, autolisado de levadura - 20 ml, glucosa - 10 g, agua destilada - 1000 ml. La mezcla preparada se funde por calentamiento, se añaden 5,0 g de citrato sódico, el medio se esteriliza a 112ºC. C durante 15 minutos, pH 7.2-7.4. Antes de verter el medio en vasos estériles, agregue 50 ml de suero de caballo, 0,1 g de ácido nalidíxico y 0,7 g (35 ml de una solución acuosa al 2%) de telurito de potasio, mezcle bien.

Caldo nutritivo con glucosa. A 100 ml de caldo nutritivo, pH 7,2-7,4, agregue 0,2 g de glucosa.

El medio preparado se esteriliza fraccionadamente durante 3 días seguidos durante 20 minutos o una vez durante 15 minutos a 0,5 atm. en un autoclave.

Agar sangre al 5%. A 100 ml de agar nutritivo al 2%, derretido y enfriado a 45 grados. C, pH 7,4-7,6, respetando las normas de asepsia, añadir 5 ml de sangre desfibrinada de cordero, caballo o conejo. La mezcla se mezcla bien, se vierte en tazas con una capa de 3-4 mm.

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Vitaminas en dosis prescritas con precisión. Los aminoácidos se utilizan como fuentes de nitrógeno. La ventaja de estos medios es que tienen una composición constante, pueden usarse para determinar las necesidades de ciertos nutrientes de los microbios.

Los medios nutrientes densos se preparan a partir de líquidos con la adición de un sellador. El agar-agar se usa generalmente como sellador. Agar-agar: un producto obtenido de algas marinas, es un polvo amarillento o placas, contiene polisacáridos de alto peso molecular, no se descompone por la mayoría de los microorganismos, no se destruye en autoclave, no cambia el valor nutricional de los medios, no inhibe el crecimiento de microbios. Para los campos inmunológico y bacteriológico, se utiliza agar clarificado congelado, que se funde a una temperatura de 85-100 ° C al hervir o esterilizar en autoclave una mezcla de polvo con agua, y forma un gel cuando se enfría a 45-48 ° C.

Para la preparación de medios nutritivos densos, se agrega agar-agar en una concentración de 1,5 a 3%.

Entornos simples.

Caldo de carne y peptona (MPB) es la base proteica de todos los ambientes.

Hay varias formas de preparar MPB:

a) en agua de carne con la adición de peptona preparada: este es el llamado caldo de peptona de carne;

b) sobre la digestión de los productos de hidrólisis de la materia prima con la ayuda de enzimas (tripsina - caldo de Hottinger, pepsina - caldo de Marten).

Son convenientes para el transporte, se pueden almacenar durante mucho tiempo, liberan a los laboratorios del enorme proceso de preparación de los medios y acercan el problema de la estandarización de los medios a la resolución. La industria médica produce medios secos de Endo, Levin, Ploskirev, agar de sulfito de bismuto, agar nutritivo, carbohidratos con indicador BP y otros.

termostatos

Los termostatos se utilizan para cultivar microorganismos.

Un termostato es un dispositivo que mantiene una temperatura constante. El dispositivo consta de un calentador, una cámara, paredes dobles entre las que circula aire o agua. La temperatura está regulada por un termorregulador. La temperatura óptima para la reproducción de la mayoría de los microorganismos es de 37°C.

Método de preparación de la placa de agar

El MPA se funde en un baño de agua y luego se enfría a 50-55°C. Se quema el cuello de la ampolla en la llama de una lámpara de alcohol, se abren las placas de Petri para que entre el cuello de las ampollas, sin tocar los bordes de la placa, se vierten 10-15 ml de MPA, se cierra la tapa, agite el plato para que el medio se distribuya uniformemente, déjelo en una superficie horizontal hasta que se solidifique. Después del secado, las placas con placa de agar se almacenan en frío.

Siembra en bucle

Se toma una gota de material con un asa enfriada estéril, se abre ligeramente un borde de la copa con la mano izquierda, se inserta un lazo en el interior y se hacen algunos golpes en el borde opuesto en un lugar, luego se arranca el lazo y el material se inocula con golpes paralelos de un borde de la copa a otro con un intervalo de 5-6 mm. Al comienzo de la siembra, cuando habrá muchos microbios en el asa, darán un crecimiento confluente, pero con cada golpe de los microbios en el asa, habrá cada vez menos microbios, y permanecerán solos y darán colonias aisladas.

Siembra según el método Drygalski

Este método se usa cuando se siembra material abundantemente sembrado con microflora (pus, heces, esputo). Para sembrar según el método Drygalsky, se toman una espátula y varias tazas (3-4). Espátula- esta es una herramienta hecha de alambre de metal o dardo de vidrio, doblada en forma de triángulo o en forma de L. El material se introduce en el primer vaso con un asa o pipeta y se distribuye uniformemente con una espátula sobre la superficie del medio, con la misma espátula, sin quemarlo, se frota el material en el medio nutriente del segundo vaso, y luego en el tercero Con esta inoculación, la primera placa tendrá un crecimiento confluente y crecerán colonias aisladas en placas posteriores.

Aislamiento de cultivo puro según Shchukevich

Para la siembra, tome un medio nutritivo recién preparado con condensado. El material de prueba se toma con un asa y se introduce cuidadosamente, observando las reglas de asepsia, sin tocar el medio y las paredes, en el agua de condensación. Las bacterias con alta motilidad "se arrastran" sobre la superficie húmeda del agar inclinado.

Como resultado del trabajo independiente, el estudiante debe saber:

1. Clasificación, morfología de los hongos, sus métodos de estudio.

2. Clasificación y morfología de los actinomicetos.

3. Reglas de regímenes antiepidémicos y precauciones de seguridad.

Ser capaz de:

1. Diferenciar microorganismos al microscopio.

2. Preparaciones teñidas microscópicamente.

3. Desinfectar el material, tratar las manos con desinfectantes.

4. Preparar preparaciones a partir de cultivos puros.

Descripción 10733-00005

Medio nutritivo Agar alcalino descripción

Agar medio nutritivo alcalino- medio nutritivo denso para el aislamiento del cólera vibrio.
La composición de alta calidad es bastante nutritiva y promueve la rápida formación de colonias de vibrio, mientras que el pirosulfito de sodio suprime parcialmente la microflora acompañante.
El factor selectivo es un aumento del nivel de pH, que finalmente suprime el desarrollo de microorganismos extraños y no afecta el crecimiento del patógeno del cólera.

Medio nutritivo Agar alcalino especificaciones

El factor selectivo es un aumento del nivel de pH, que finalmente suprime el desarrollo de microorganismos extraños y no afecta el crecimiento del patógeno del cólera.
El cultivo se realiza a 37°C durante 12-14 horas.

Composición de agar alcalino :
Hidrolizado pancreático de harina de pescado, peptona enzimática seca, extracto de levadura, glucosa, fosfato de sodio disustituido, cloruro de sodio, metabisulfito de sodio, carbonato de sodio, agar.

Preparación de agar alcalino:
La preparación en la cantidad necesaria para la preparación de una serie específica de medio nutritivo se mezcla en 1 litro de agua destilada, se hierve hasta que el agar se derrita por completo, se filtra a través de un filtro de gasa de algodón, se vierte en viales y se esteriliza en autoclave durante 20 minutos a una temperatura
(121±1) °C.
El medio nutritivo listo es transparente, amarillo. Se permite una ligera opalescencia.
pH 8,0±0,2
El medio preparado se puede almacenar durante 10-14 días a una temperatura de 2-8 °C en un lugar protegido de la luz.

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