Alkalisches Agar-Nährmedium zur Isolierung von Vibrio cholerae. Kulturmedien Alkalischer Agar

Blutagar für CAMP-Test. Zu 2 % Nähragar, pH 7,4–7,6, 0,2 % Glucose und rote Blutkörperchen von Schafen oder Rindern hinzufügen. Rote Blutkörperchen aus Citratblut werden dreimal mit isotonischer Natriumchloridlösung gewaschen, um möglicherweise im Serum enthaltenes Antihämolysin zu entfernen. Anschließend werden sie in derselben Lösung auf das ursprüngliche Blutvolumen resuspendiert. Dem Agar wird 5 % Erythrozytensuspension zugesetzt.

Gallenalkalischer Agar (im Folgenden als BAL bezeichnet). Trockener Nähragar – 35,0 g; Hefeautolysat – 20,0 ml; Glukose - 10,0 g; destilliertes Wasser - 600 ml. Das Agar wird geschmolzen, filtriert, frische Rindergalle – 400,0 ml und Natriumcarbonat – 5,0 g werden hinzugefügt.

Sterilisieren Sie das vorbereitete Medium, indem Sie es 15 Minuten lang bei 112 °C autoklavieren. Vor dem Abfüllen in Becher werden dem Medium 50,0 ml frisches Blut (Schaf, Kaninchen oder Mensch), 12,5 ml einer 0,01 %igen Kristallviolettlösung und 20 ml Kaliumhydroxidlösung (im Folgenden als KOH bezeichnet) zugesetzt.

Milch mit Methylenblau. Frische Milch wird zum Kochen gebracht, einen Tag stehen gelassen, aus der Sahne genommen, ein zweites Mal aufgekocht, erneut einen Tag stehen gelassen und die oberste Schicht ein zweites Mal entfernt. Die Magermilch wird durch eine dicke Schicht Watte filtriert und mit einer 10 %igen Natriumcarbonatlösung auf pH 7,2 alkalisiert. Zu 100 ml Milch 2,0 ml einer 1 %igen wässrigen Lösung von Methylenblau hinzufügen. Das so vorbereitete Medium wird zu 5,0 ml in sterile Reagenzgläser gegossen und 30 Minuten lang unter fließendem Dampf sterilisiert.

Enterokokken-Differentialdiagnosemedium (EDDS). Trockener Nähragar – 35 g, Hefeautolysat zur Herstellung von Nährmedien – 20 ml, Glucose – 10 g, destilliertes Wasser – 800 ml. Beim Erhitzen schmelzen, filtrieren, 15 Minuten bei 112 °C im Autoklaven sterilisieren, pH 7,2–7,4.

Vor dem Abfüllen in Tassen wird dem Nährmedium TTX - 0,1 g zugesetzt; wässrige Lösung von Kristallviolett 0,01 % – 12,5 ml; Nalidixinsäure – 0,1 g; sterile Magermilch, erhitzt auf 44-45 0 C - 200 ml; frisches defibriniertes Blut (tierisch oder menschlich) – 50 ml. Der Inhalt wird gründlich gerührt und in 7-ml-Becher abgefüllt.

Zucker-Hefe-Nähragar mit Kaliumtellurit. Trockener Nähragar – 35 g, Hefeautolysat – 20 ml, Glucose – 10 g, destilliertes Wasser – 1000 ml. Die vorbereitete Mischung wird beim Erhitzen geschmolzen, Natriumcitrat wird hinzugefügt - 5,0 g. Das Medium wird bei 112 0 sterilisiert. 15 Minuten bei C, pH 7,2–7,4. Bevor Sie das Medium in sterile Becher gießen, fügen Sie 50 ml Pferdeserum, 0,1 g Nalidixinsäure und 0,7 g (35 ml einer 2 %igen wässrigen Lösung) Kaliumtellurit hinzu und mischen Sie gründlich.

Nährstoffreiche Brühe mit Glukose. Zu 100 ml Nährbrühe, pH 7,2-7,4, 0,2 g Glucose hinzufügen.

Das vorbereitete Medium wird in Fraktionen 3 Tage hintereinander für 20 Minuten oder einmal für 15 Minuten bei 0,5 atm sterilisiert. in einem Autoklaven.

5 % Blutagar. Dazu 100 ml 2 % Nähragar geben, aufschmelzen und auf 45 Grad abkühlen lassen. C, pH 7,4-7,6, unter Beachtung der Asepsisregeln, 5 ml defibriniertes Lamm-, Pferde- oder Kaninchenblut hinzufügen. Die Mischung wird gründlich gemischt und in einer Schicht von 3-4 mm in Tassen gegossen.

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Vitamine in genau vorgeschriebener Dosierung. Sie nutzen Aminosäuren als Stickstoffquellen. Der Vorteil dieser Medien besteht darin, dass sie eine konstante Zusammensetzung haben; mit ihnen lässt sich der Bedarf von Mikroben an bestimmten Nährstoffen ermitteln.

Feste Nährmedien werden aus flüssigen Medien unter Zusatz eines Versiegelungsmittels hergestellt. Als Versiegelungsmittel wird üblicherweise Agar-Agar verwendet. Agar-Agar ist ein aus Algen gewonnenes Produkt, es ist ein gelbliches Pulver oder Platten, enthält hochmolekulare Polysaccharide, wird von den meisten Mikroorganismen nicht abgebaut, wird durch Autoklavieren nicht zerstört, verändert den Nährwert der Medien nicht und tut es auch hemmen nicht das Wachstum von Mikroben. Für immunologische und bakteriologische Bereiche wird gefrorener, geklärter Agar verwendet, der beim Kochen oder Autoklavieren einer Pulver-Wasser-Mischung bei einer Temperatur von 85-100 °C schmilzt und beim Abkühlen auf 45-48 °C ein Gel bildet.

Zur Herstellung dichter Nährmedien wird Agar-Agar in einer Konzentration von 1,5 bis 3 % zugesetzt.

Einfache Umgebungen.

Fleisch-Pepton-Brühe (MPB) ist die Proteinbasis aller Medien.

Es gibt verschiedene Möglichkeiten, MPB vorzubereiten:

a) in Fleischwasser unter Zusatz von fertigem Pepton – das ist die sogenannte Fleisch-Pepton-Brühe;

b) zum Aufschluss von Hydrolyseprodukten von Rohstoffen mittels Enzymen (Trypsin – Hottinger-Bouillon, Pepsin – Martin-Bouillon).

Sie sind bequem zu transportieren, können lange gelagert werden, entlasten Labore von dem enormen Prozess der Medienvorbereitung und bringen sie der Lösung des Problems der Medienstandardisierung näher. Die medizinische Industrie produziert Trockenmedien Endo, Levin, Ploskirev, Wismutsulfit-Agar, Nähragar, Kohlenhydrate mit BP-Indikator und andere.

Thermostate

Thermostate werden zur Kultivierung von Mikroorganismen eingesetzt.

Ein Thermostat ist ein Gerät, das eine konstante Temperatur aufrechterhält. Das Gerät besteht aus einer Heizung, einer Kammer und Doppelwänden, zwischen denen Luft oder Wasser zirkuliert. Die Temperatur wird durch einen Thermostat reguliert. Die optimale Temperatur für die Vermehrung der meisten Mikroorganismen liegt bei 37°C.

Verfahren zur Herstellung von Plattenagar

MPA wird in einem Wasserbad geschmolzen und dann auf 50–55 °C abgekühlt. Der Flaschenhals wird in der Flamme einer Alkohollampe verbrannt, die Petrischalen werden geöffnet, so dass der Flaschenhals hineinpasst, ohne die Ränder der Schale zu berühren, 10-15 ml MPA werden hineingegossen, der Deckel wird geöffnet Im geschlossenen Zustand wird die Schale geschüttelt, damit sich das Medium gleichmäßig verteilt, und auf einer horizontalen Fläche belassen, bis es aushärtet. Nach dem Trocknen werden Plattenagarplatten in der Kälte gelagert.

Schleifensaat

Nehmen Sie mit einer steril gekühlten Öse einen Tropfen Material, öffnen Sie einen Rand des Bechers mit der linken Hand, bringen Sie die Öse hinein und machen Sie ein paar Striche an einer Stelle mit einer Öse am gegenüberliegenden Rand, reißen Sie dann die Öse ab und inokulieren Sie Das Material in parallelen Strichen von einem Rand des Bechers zum anderen im Abstand von 5–6 mm auftragen. Zu Beginn der Aussaat, wenn viele Mikroben in der Schleife vorhanden sind, kommt es zu einem konfluenten Wachstum, aber mit jedem Hub gibt es immer weniger Mikroben in der Schleife, und sie bleiben einzeln und bilden isolierte Kolonien.

Aussaat nach der Drigalsky-Methode

Diese Methode wird bei der Beimpfung von Material angewendet, das stark mit Mikroflora (Eiter, Kot, Sputum) kontaminiert ist. Um nach der Drigalsky-Methode zu säen, nehmen Sie einen Spatel und mehrere Tassen (3-4). Spachtel- Dies ist ein Instrument aus Metalldraht oder Glaspfeil, das in Form eines Dreiecks oder L-Form gebogen ist. Das Material wird mit einer Öse oder Pipette in den ersten Becher eingeführt und mit einem Spatel gleichmäßig auf der Oberfläche des Mediums verteilt. Mit demselben Spatel wird das Material im zweiten Becher in das Nährmedium eingerieben, ohne es zu verbrennen in der dritten. Bei einer solchen Aussaat kommt es im ersten Becher zu einem konfluenten Wachstum, und in den nachfolgenden Bechern wachsen isolierte Kolonien.

Isolierung der Reinkultur nach Shchukevich

Nehmen Sie zur Aussaat einen frisch zubereiteten Nährboden mit Kondensat. Das Prüfmaterial wird mit einer Öse entnommen und unter Beachtung der Regeln der Asepsis vorsichtig, ohne das Medium und die Wände zu berühren, in das Kondenswasser eingebracht. Bakterien mit hoher Mobilität „kriechen“ auf die feuchte Oberfläche des Schrägagars.

Als Ergebnis der selbstständigen Arbeit sollte der Studierende wissen:

1. Klassifizierung, Morphologie von Pilzen, ihre Untersuchungsmethoden.

2. Klassifizierung und Morphologie von Actinomyceten.

3. Regeln der Antiepidemie-Regime und Sicherheitsvorkehrungen.

In der Lage sein:

1. Mikroorganismen mittels Mikroskopie differenzieren.

2. Mikroskopieren Sie die gefärbten Präparate.

3. Desinfizieren Sie das Material, behandeln Sie Ihre Hände mit Desinfektionsmitteln.

4. Bereiten Sie Präparate aus Reinkulturen vor.

Beschreibung 10733-00005

Beschreibung des Nährmediums Agar alkalisch

Nährmedium alkalischer Agar- ein dichtes Nährmedium zur Isolierung von Vibrio cholerae.
Hochwertige Zusammensetzung, sehr nahrhaft und fördert die schnelle Bildung von Vibrio-Kolonien, während Natriumpyrosulfit die begleitende Mikroflora teilweise unterdrückt.
Der selektive Faktor ist ein erhöhter pH-Wert, der letztlich die Entwicklung fremder Mikroorganismen unterdrückt und das Wachstum des Cholera-Erregers nicht beeinträchtigt.

Technische Eigenschaften des Nährmediums Alkali-Agar

Der selektive Faktor ist ein erhöhter pH-Wert, der letztlich die Entwicklung fremder Mikroorganismen unterdrückt und das Wachstum des Cholera-Erregers nicht beeinträchtigt.
Die Kultivierung erfolgt 12–14 Stunden bei 37 °C.

Zusammensetzung des alkalischen Agars :
Pankreashydrolysat aus Fischmehl, trockenes enzymatisches Pepton, Hefeextrakt, Glucose, Dinatriumphosphat, Natriumchlorid, Natriummetabisulfit, Natriumcarbonat, Agar.

Herstellung von alkalischem Agar:
Das Arzneimittel in der für die Herstellung einer bestimmten Nährmediumreihe erforderlichen Menge wird in 1 Liter destilliertem Wasser gerührt, gekocht, bis das Agar vollständig geschmolzen ist, durch einen Baumwollgazefilter filtriert, in Flaschen abgefüllt und durch Autoklavieren für 20 Minuten sterilisiert Minuten bei Temperaturtemperatur
(121±1) °C.
Das vorbereitete Nährmedium ist transparent und gelb gefärbt. Leichte Opaleszenz ist zulässig.
pH-Wert 8,0 ± 0,2
Das vorbereitete Medium kann 10–14 Tage lang bei einer Temperatur von 2–8 °C an einem lichtgeschützten Ort gelagert werden.

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